Prevalência e fatores de risco para a leptospirose e brucelose na população canina da Estância Turística de Ibiúna, São Paulo, Brasil / Prevalence and risk factors for leptospirosis and brucellosis in the canine population of the Tourist Resort of Ibiúna, State of São Paulo, Brazil

O objetivo do trabalho foi determinar a prevalência de leptospirose e brucelose por Brucella canis e determinar os fatores de risco associados com a positividade em cães da Estância Turística de Ibiúna, estado de São Paulo, Brasil. Foram examinados 570 animais distribuídos em 4 regiões nos 48 bairros do município, no período de setembro de 2007 a março de 2008. O diagnóstico sorológico da leptospirose foi efetuado com o teste de soroaglutinação microscópica (SAM), e para o diagnóstico de brucelose foi realizado hemocultivo. Dos 570 animais examinados, 187 (32,8%; IC95% 28,9 - 36,8) foram soropositivos para leptospirose, com predomínio de reações para os sorovares Pyrogenes, Autumnalis e Canicola, e 6 (1,05%; IC95% 0,4 - 2,2) foram positivos para brucelose. A variável atividade sexual (OR = 1,73) foi identificada como fator de risco associado à positividade para leptospirose, e o manejo do tipo solto foi considerado fator de risco tanto para leptospirose (OR = 1,96) quanto para brucelose (OR = 10,85). Conclui-se que a leptospirose e a brucelose estão presentes em cães da Estância Turística de Ibiúna, São Paulo, e que a atividade sexual e o acesso irrestrito à rua são condições associadas com a prevalência das infecções.(AU)

The aim of this survey was to determine the prevalence of leptospirosis and brucellosis due to Brucella canis and to determine the risk factors associated with positivity in dogs of the Tourist Resort of Ibiúna, State of São Paulo, Brazil. A total of 570 blood samples were collected from dogs from 4 regions of 48 districts of the county of Ibiúna during the period of September 2007 to March 2008. Serological diagnosis of leptospirosis was performed with the microscopic agglutination test (MAT), and blood culture was used for the diagnosis of brucellosis. Of the 570 dogs used 187 (32.8%; 95%CI 28.9 - 36.8) were seropositive to leptospirosis, with predominance of reactions to serovars Pyrogenes, Autumnalis and Canicola, and 6 (1.05%; 95%CI 0.4 - 2.2) were positive to brucellosis. Variable sexual activity (OR = 1.73) was identified as risk factor associated with the positivity to leptospirosis, and free access to street was considered risk factor for both leptospirosis (OR = 1.96) and brucellosis (OR = 10.85). It is concluded that leptospirosis and brucellosis are present in dogs of the Tourist Resort of Ibiúna, State of São Paulo, and sexual activity and free access to street are conditions associated with the prevalence of infections.(AU)

Paralytic rabies in swine

Rabies transmitted by vampire bats was diagnosed in pigs with paralysis of the pelvic limbs. Diffuse nonsuppurative encephalomyelitis, affecting mainly the spinal cord, was observed histologically. Despite the various diagnosis of rabies in pigs this is the first report of clinical signs and pathology of rabies transmitted by vampire bats.

Multiple substitutions in biologically active domains ofrabies virus glycoprotein can be related to pathogenicprofile / Múltiplas substituições em domínios biologicamente ativos da glicoproteína do vírusrábico podem estar relacionadas com o perfil patogênico

Pathogenic profile of a rabies virus isolated from an insectivorous bat Lasiurus ega was compared with a rabies fixedvirus strain (CVS/32) in hamster and mouse. Incubation and clinical periods, clinical manifestation and death rateswere compared. Challenge of hamsters with L. ega was performed using: 10 2,611-4,021 LD50 /0,05 mL;. For CVS were used10 3,7-4,7 LD50 /0,05 mL. Were tested intramuscular (IM), intradermal (ID), intranasal (IN), epidermal abrasion (EA)inoculation routes. Viral antigen in brains was confirmed by Direct Immunofluorescence Test. Mortality percentagesobserved with L. ega rabies virus isolate were the following in hamster: 3,5 % IM, 10,710% IN; in mice: 50.0% IM, 30.0%IN. Furious rabies was predominant. Mortality percentages observed with CVS/32 in hamster: 12.5% IM, 62.5% ID,12.5% IN; in mice 100.0% IM, 70.0% ID, 10.0% IN. Paralytic rabies was found with this strain in both animal models.Epidermic abrasion was not a suitable challenge route. Incubation period was 5-7 days for CVS and 11-16 days for L. egaisolate, meanwhile clinical periods were comprehended between 4–7 days for both viruses. Several substitutions weredetected at antigenic domains of glycoprotein: AI (position 231), AII (34–42 and 198-200), domain of fusion dependenton low pH (102–179), transmembrane domain (440–461) and residue 242. These viruses showed contrasting biologicalbehaviors that can be linked to those substitutions at antigenic domains previously described.

O perfil patogênico de um vírus da raiva isolado de um morcego insetívoro Lasiurus ega foi comparado com o de vírusfixo de raiva (CVS/32) em hamster e camundongo, determinando os períodos de incubação e clínico, manifestaçãoclínica e mortalidade. Os animais foram desafiados com 10 2,611 - 4,021 DL50 /0,05 mL do isolado de L. ega e 10 3,7- 4,7 LD50 /0,05 mL do CVS/32, usando as vias: intramuscular (IM), intradermica (ID), intranasal (IN) e abrasão epidermica (AE).A presença do antígeno viral foi confirmada pela prova de imunofluorescência direta. As porcentagens de mortalidadeobservadas com o isolado de L. ega foram as seguintes em hamster: 3,5% IM, 10,71% IN; em camundongo: 50.0%IM, 30.0% IN. A forma furiosa da doença foi predominante. As porcentagens de mortalidade observadas com o vírusCVS/32 em hamster foram as seguintes: 12.5% IM, 62.5% ID, 12.5% IN; em camundongo 100.0% IM, 70.0% ID,10.0% IN. Com este vírus foi observada raiva paralitica. A via AE mostrou-se inadequada para induzir doença. Operíodo de incubação foi de 5–7 dias para o CVS/32 e 11-16 dias para o isolado de L. ega, entre tanto os períodosclínicos oscilaram entre 4–7 dias para ambos os vírus. Varias substituições foram achadas em domínios antigênicos daglicoproteína: AI (posição 231), AII (34–42 e 198-200), domínio de fusão dependente de baixo pH (102–179), domínioda transmembrana (440–461) e resíduo 242. Esses vírus mostraram comportamentos biológicos distintos o que poderiaestar ligado às substituições nos domínios antigênicos anteriormente descritos.

Estudo imunológico e genético de 10 isolados do vírus da raiva de morcegos do Rio de Janeiro, Sudeste do Brasil / Immunological and genetic study of 10 bat rabies virus isolates from Rio de Janeiro State, Southeast

O presente trabalho visou estudar 10 isolados de vírus da raiva de morcegos hematófagos e não-hematófagos do Estado do Rio de Janeiro em suas características genéticas quanto aos genes N e G, além da resposta de camundongos vacinados com a vacina anti-rábica produzida pela replicação da amostra Pitman-Moore em cultivo celular, frente ao desafio com estes isolados virais, utilizando-se um ensaio imunológico baseado no teste de potência NIH. A vacina anti-rábica utilizada na imunização dos camundongos ofereceu proteção em mais de 80% dos camundongos vacinados com a diluição 1:5 da vacina, frente à maioria dos isolados. A análise filogenética do gene da proteína N apresentou um padrão de agregação dividido em variante de morcego hematófago e variante de morcego insetívoro, com todos os isolados de morcegos frugívoros Artibeus sp. tendo sido segregados com a variante característica de morcegos Desmodus rotundus. Foram observadas diferenças filogenéticas entre as variantes do vírus da raiva de morcego hematófago isoladas na Região Noroeste do Estado do Rio de Janeiro e aquelas isoladas nas Regiões Metropolitana e Sul do Estado. A substituição do resíduo ácido aspártico por ácido glutâmico na posição 118, encontradas na caracterização genética da proteína G dos isolados 704/97BR-DR e 151/98BR-DR, permite inferir que esta posição esteja relacionada à antigenicidade viral. Não foram observadas diferenças genéticas temporais entre os isolados estudados. A vacina anti-rábica utilizada ofereceu proteção satisfatória contra a maioria dos isolados estudados.

In the present study we analyzed 10 bats rabies viruses isolated from Rio de Janeiro State, focusing on its genetic characteristics from genes N and G, and also in the response of mice vaccinated with cell-culture rabies vaccine, produced with the Pitman-Moore strain, after viral challenge with bat rabies isolates, using an immunologic essay based on NIH vaccine potency test. The vaccine used conferred protection in more than 80% of the mice vaccinated with 1:15 vaccine dilution, after viral challenge. N gene genetic analysis divided the rabies virus isolates into haematophagous and insectivorous bat variants, with all isolates from Artibeus sp. frugivorous bats being clustered with the variant characteristic of the Desmodus rotundus vampire bat. Phylogenetic differences between isolates from Northeast Region and those from the Metropolitan and South Regions of Rio de Janeiro State were observed. The substitution of an aspartic acid to a glutamic acid found in the position 118 of G gene genetic characterization from samples 704/97BR-DR and 151/98BR-DR seems to be related to viral antigenicity. There were no time-related genetic differences between the studied samples. The vaccine employed was found with satisfactory protection against the majority of the isolates used.

Isolation of rabies virus from the parotid salivary glands of foxes (Pseudalopex vetulus) from Paraíba State, Northeastern Brazil / Isolamento de vírus rábico de glândulas salivares parótidas de raposas (Pseudalopex vetulus) do Estado da Paraíba, Nordeste do Brasil

To determine the presence of rabies virus in the parotid salivary glands, 12 road-killed rabies-positive hoary foxes (Pseudoalopex vetulus) were tested by using the fluorescent antibody test (FAT) and mouse inoculation test (MIT). All 12 parotid salivary glands were positive for both tests, although in some cases several passages were required. The findings of this study support the importance of the hoary fox as rabies reservoir in the semi-arid region of Paraíba State, Northeastern Brazil.

Para determinar a presença de vírus rábico em glândulas salivares parótidas, 12 raposas (Pseudalopex vetulus) atropeladas em rodovias e positivas para raiva foram testadas pelo teste de imunofluorescência direta (IFD) e teste de inoculação em camundongos (IC). Todas as 12 glândulas salivares parótidas foram positivas em ambos os testes, embora, em alguns casos, várias passagens terem sido necessárias. Os achados do presente trabalho reforçam a importância das raposas como reservatórios de raiva no semi-árido do Estado da Paraíba, Nordeste do Brasil.

Complete genome analysis of a rabies virus isolate from Brazilian wild fox.

The complete genome sequence of wild-type rabies virus (RABV) isolated from a wild Brazilian hoary fox (Dusicyon sp.), the BR-Pfx1 isolate, was determined and compared with fixed RABV strains. The genome structure and organization of the BR-Pfx1 isolate were composed of 11,924 nt and included the five standard genes of rhabdoviruses. Sequences of mRNA start and stop signals for transcription were highly conserved among all structural protein genes of the BR-Pfx1 isolate. All amino acid residues in the glycoprotein (G) gene associated with pathogenicity were retained in the BR-Pfx1 isolate, while unique amino acid substitutions were found in antigenic region I of the nucleoprotein gene and III of G. These results suggest that although the standard genome structure and organization of the RABV isolate are common between the BR-Pfx1 isolate and fixed RABV strains, the unique amino acid substitutions in functional sites of the BR-Pfx1 isolate may result in different biological characteristics from fixed RABV strains.

Isolation of rabies virus from the parotid salivary glands of foxes (Pseudalopex vetulus) from Paraíba State, Northeastern Brazil.

To determine the presence of rabies virus in the parotid salivary glands, 12 road-killed rabies-positive hoary foxes (Pseudoalopex vetulus) were tested by using the fluorescent antibody test (FAT) and mouse inoculation test (MIT). All 12 parotid salivary glands were positive for both tests, although in some cases several passages were required. The findings of this study support the importance of the hoary fox as rabies reservoir in the sem-iarid region of Paraíba State, Northeastern Brazil.

Experimental infection of vampire bats Desmodus rotundus (E. Geoffroy) maintained in captivity byfeeding defibrinated blood added with rabies vírus / Infecção experimental de morcegos hematófagos Desmodus rotundus(E. Geoffroy) mantidos em cativeiro e alimentados com sangue desfibrinado adicionado de vírus da raiva

In vampire bats, food sharing behavior would contribute for the oral transmission of rabies virus among the roostmates. To test this hypothesis, 10 captive Desmodus rotundus bats were fed defibrinateds wine blood containing mice brain suspension of PV-strain of rabies virus. Other 10 bats were fed blood mixed with a mice brain suspension of T-9/95 vampire-bat-field isolate of rabies virus. Another group of 10 bats was inoculated intramuscularly with a mice brain suspension of the T-9/95 isolate. Other 20 bats were maintained without treatment and fed defibrinated swine blood for 158 days. All animals found dead during the observation period or those sacrificed at the end of the experiment were necropsied and specimens such as the brain and non-nervous tissues were collected for rabies examination. Four bats inoculated intramuscularly developed clinical rabies, with signs lasting 1-2 days, and the survival periods ranged from 11-14 days. The initial rabies diagnosis was based on direct fluorescent antibody (dFA) and mouse inoculation test (MIT) performed only on brain specimens, and subsequently, brains andthe non-nervous materials were further reexamined by means of dFA, MIT and heminested-polymerase chain reaction (ht-PCR)technique. The intake of the PV-strain caused rabies in 2 bats, with survival period of 25 and 32 days, while the three bats ingesting theT-9/95 isolate presented periods of 26-31 days. Although discrepant results were found among the diagnostic tests, viruses have disseminated to the central nervous system and other organs, as seenin bats inoculated intramuscularly

Em morcegos hematófagos, o hábito de compartilhar alimentopoderia contribuir na transmissão oral do vírus da raiva. Para verificar esta hipótese, 10 morcegos Desmodus rotundus em cativeiro foram alimentados com sangue suíno desfibrinado, contendo suspensão de cérebros de camundongos infectados com vírus rábico PV. Outros 10 camundongos receberam sangue contendo suspensão cerebral de camundongos infectados com vírus de morcego hematófago (T-9/95). Um grupo de 10 camundongos foi inoculado intramuscularmente com suspensão de vírus T-9/95. Outros 20 morcegos foram mantidossem tratamento e alimentados com sangue desfibrinado por 158 dias. Todos os animais encontrados mortos durante o período de observação ou sacrificados no final do experimento foram necropsiados e os cérebros e órgãos não-nervosos foram colhidos para a confirmação da raiva. Quatro morcegos inoculados intramuscularmente apresentaram raiva clínica, com sinais persistind opor 1-2 dias e os períodos de sobrevivência variaram de 11-14 dias. O diagnóstico da raiva inicialmente foi realizado somente com os fragmentos do cérebro, submetendo-os às provas de imunoflurescência direta (IFD) e inoculação em camundongos (IC).Subseqüentemente, os cérebros e os órgãos não-nervosos foram reexaminados com as técnicas de IFD, IC e heminested-polymerase chain reaction (ht-PCR). A ingestão do vírus PV causou raiva em dois morcegos, com período de sobrevivência de 25 e 32 dias, enquanto que os três morcegos que ingeriram o isolado T-9/95 apresentaram períodos de 26-31 dias. Embora encontrando resultados discrepantes entre as técnicas diagnósticas utilizadas, os vírus ingeridos pelos morcegos foram detectados no sistema nervoso central e outros órgãos não-nervosos, como nos morcegos inoculados intramuscularmente

Vírus da raiva em quirópteros naturalmente infectados no Estado de São Paulo, Brasil / Rabies virus in naturally infected bats in the State of São Paulo, Southeastern Brazil

OBJETIVO: Identificar as espécies de morcegos envolvidas na manutenção do ciclo da raiva, verificar a distribuição do vírus da raiva em tecidos e órgãos de morcegos e os períodos de mortalidade dos camundongos inoculados. MÉTODOS: A positividade para o vírus da raiva foi avaliada por imunofluorescência direta em morcegos de municípios do Estado de São Paulo, de abril de 2002 a novembro de 2003. A distribuição do vírus nos morcegos foi avaliada pela inoculação de camundongos e infecção de células N2A, com suspensões a 20 por cento preparadas a partir de fragmentos de diversos órgãos e tecidos, além de cérebro e glândula salivar. A mortalidade dos camundongos foi observada diariamente, após inoculação intracerebral. RESULTADOS: Dos 4.393 morcegos pesquisados, 1,9 por cento foram positivos para o vírus da raiva, pertencentes a dez gêneros, com predomínio de insetívoros. A média do período máximo de mortalidade dos camundongos pós-inoculação a partir de cérebros e glândulas salivares de morcegos hematófagos foi de 15,33±2,08 dias e 11,33±2,30 dias; insetívoros, 16,45±4,48 dias e 18,91±6,12 dias; e frugívoros, 12,60±2,13 dias e 15,67±4,82 dias, respectivamente. CONCLUSÕES: As espécies infectadas com o vírus da raiva foram: Artibeus lituratus, Artibeus sp., Myotis nigricans, Myotis sp., Eptesicus sp., Lasiurus ega, Lasiurus cinereus, Nyctinomops laticaudatus, Tadarida brasiliensis, Histiotus velatus, Molossus rufus, Eumops sp. e Desmodus rotundus. A pesquisa de vírus em diferentes tecidos e órgãos mostrou-se que os mais apropriados para o isolamento foram cérebro e glândulas salivares.

OBJECTIVE: To identify the species of bats involved in maintaining the rabies cycle; to investigate the distribution of the rabies virus in the tissues and organs of bats and the time taken for mortality among inoculated mice. METHODS: From April 2002 to November 2003, bats from municipalities in the State of São Paulo were screened for the presence of the rabies virus, by means of direct immunofluorescence. The virus distribution in the bats was evaluated by inoculating mice and N2A cells with 20 percent suspensions prepared from fragments of different organs and tissues, plus the brain and salivary glands. The time taken for mortality among the mice was monitored daily, following intracerebral inoculation. RESULTS: Out of the 4,395 bats received, 1.9 percent were found positive for the rabies virus. They belonged to ten genera, with predominance of insectivores. The maximum mean times taken for mortality among the mice following inoculation with brain and salivary gland material were 15.33±2.08 days and 11.33±2.30 days for vampire bats, 16.45±4.48 days and 18.91±6.12 days for insectivorous bats, and 12.60±2.13 days and 15.67±4.82 days for frugivorous bats, respectively. CONCLUSIONS: The species infected with the rabies virus were: Artibeus lituratus, Artibeus sp., Myotis nigricans, Myotis sp., Eptesicus sp., Lasiurus ega, Lasiurus cinereus, Nyctinomops laticaudatus, Tadarida brasiliensis, Histiotus velatus, Molossus rufus, Eumops sp. and Desmodus rotundus. Virus investigation in the different tissues and organs showed that the brain and salivary glands were the most suitable sites for virus isolation.

[Rabies virus in naturally infected bats in the State of São Paulo, Southeastern Brazil]. / Vírus da raiva em quirópteros naturalmente infectados no Estado de São Paulo, Brasil.

OBJECTIVE: To identify the species of bats involved in maintaining the rabies cycle; to investigate the distribution of the rabies virus in the tissues and organs of bats and the time taken for mortality among inoculated mice. METHODS: From April 2002 to November 2003, bats from municipalities in the State of São Paulo were screened for the presence of the rabies virus, by means of direct immunofluorescence. The virus distribution in the bats was evaluated by inoculating mice and N2A cells with 20% suspensions prepared from fragments of different organs and tissues, plus the brain and salivary glands. The time taken for mortality among the mice was monitored daily, following intracerebral inoculation. RESULTS: Out of the 4,395 bats received, 1.9% were found positive for the rabies virus. They belonged to ten genera, with predominance of insectivores. The maximum mean times taken for mortality among the mice following inoculation with brain and salivary gland material were 15.33+/-2.08 days and 11.33+/-2.30 days for vampire bats, 16.45+/-4.48 days and 18.91+/-6.12 days for insectivorous bats, and 12.60+/-2.13 days and 15.67+/-4.82 days for frugivorous bats, respectively. CONCLUSIONS: The species infected with the rabies virus were: Artibeus lituratus, Artibeus sp., Myotis nigricans, Myotis sp., Eptesicus sp., Lasiurus ega, Lasiurus cinereus, Nyctinomops laticaudatus, Tadarida brasiliensis, Histiotus velatus, Molossus rufus, Eumops sp. and Desmodus rotundus. Virus investigation in the different tissues and organs showed that the brain and salivary glands were the most suitable sites for virus isolation.

Experiments on intramuscular inoculation and feeding domestic cats (Felis catus) with brains of mice previously infected by rabies viruses

Nineteen kittens divided into four groups were fed with brains of mice infected with rabies viruses. Each four kittens (group I) received four brains infected with the PV fixed strain; nine kittens (group II) ingested 4-5 brains infected with the field isolate T-9/95, isolated from the Desmodus rotundus vampire bat; two kittens (group III) fedten T-9/95-infected brains, and four cats consumed 32-37 PV strain infected brains. One adult male, inoculated into masseter muscle with a 20% T-9/95-infected brain suspension, presented rabies after an incubation period of six days, followed with 8 days of clinical evolution, and died there after and this cat was considered as the rabies “positive standard”. After observing for 20-230 days, all the cats feeding the rabid brains were submitted to euthanasia, by using Acepran®, Zoletil®,and T-61®. At necropsy, samples of brain, heart, lung, kidney, submaxillary salivary gland, and cervical medulla were collected from all the cats and further submitted to the direct fluorescence antibodytest (dFA), mouse inoculation test (MIT) and to the reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) technique. Brain, cervical medulla, and the submaxillary salivary gland of the positive standard cat were dFA-positive, and brain and cervical medulla were positive for MIT. All specimens of this cat tested by the RT-PCR were found positive. No animals ingesting PV or T-9/95 virus-infectedbrains developed clinical signs and all materials tested were negativeby dFA and MIT. Several specimens, however, showed positive reactions by the RT-PCR technique, but cats were resistant to rabies through the viruses administered orally.

Dezenove gatos, divididos em quatro grupos, foram alimentadoscom cérebros de camundongos infectados com vírus de raiva. Cada um dos quatro gatos (grupo I) receberam quatro cérebros infectados com vírus fixo PV; nove gatos (grupo II) ingeriram 4-5 cérebros infectados com uma amostra de campo T-9/95, isolada do morcego Desmodus rotundus; dois gatos (grupo III) ingeriram 10 cérebros infectados com T-9/95 e quatro gatos (grupo IV) ingeriram 32-37 cérebros infectados com vírus PV. Um macho adulto, inoculado no músculo masséter, com uma suspensão cerebral a 20% da amostra T-9/95, desenvolveu raiva após período de incubação de seis dias,seguidos por oito dias de evolução clínica, morrendo em seguida. Este gato foi denominado de “padrão positivo”. Após observação por um período de 20-230 dias, todos os gatos que receberam cérebros foram submetidos à eutanásia, utilizando Acepran®, Zoletil® e T-61®. À necropsia, foram colhidas amostras do cérebro, coração, pulmão,rim, glândula salivar submaxilar e medula cervical e submetidas à prova de imunofluorescência direta (IFD), inoculação em camundongos (IC), e reação em cadeia pela polimerase-transcriptase reversa (RT-PCR). No “padrão positivo”, cérebro, medula cervical eglândula salivar foram positivos à IFD e à IC, cérebro e medula cervical foram os positivos. Todos os espécimes do “padrão positivo” foram positivos à RT-PCR. Nenhum animal que ingeriu cérebros contendo amostras de vírus PV ou T-9/95 apresentou sinais clínicos e todos osespécimes testados foram negativos à IFD e IC, no entanto, alguns espécimes reagiram positivamente à RT-PCR, porém, os gatos foram resistentes à raiva com vírus administrados oralmente. Master thesis submitted to the Faculty of Veterinary Medicine and Zootechny of the University of São Paulo, on June 24th, 2003. Fellowship from the Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo-FAPESP, process No. 01/07188-8.

Isolation of bovine coronavirus (BCoV) in monolayers of HmLu-1 cells

A partir de 20 amostras fecais de bezerros, com quadro clínico de diarréia, positivas para BCoV por hemaglutinacão/inibicão da hemaglutinacão (HA/HI), procedeu-se o isolamento viral em monocamadas de células da linhagem HmLu-1. Até a quinta passagem seriada, 13 apresentaram efeito citopático do tipo sincicial, semelhante à amostra padrão Kakegawa de BCoV. Ao serem submetidas a uma reacão de soroneutralizacão com gamaglobulina anti-coronavírus bovino, 8 delas foram consideradas positivas, uma vez que o efeito citopático foi neutralizado. Ao serem tituladas e submetidas à reacão de soroneutralizacão em microplacas, apenas 3 delas puderam ser confirmadas como positivas. As células da linhagem HmLu-1 mostraram-se permissivas para o isolamento de BCoV, todavia a baixa intensidade na replicacão viral demonstrou ser necessário o desenvolvimento de novas metodologias para se poder alcancar esse intuito e a confirmacão do isolamento por soroneutralizacão.

Cross neutralizing antibodies in hamsters vaccinated with leptospiral bacterins produced with three serovars of serogroup Sejroe

Three leptospiral bacterins, produced with different serovars of Serogroup Sejroe, namely the hardjo (bacterin A), wolffi (bacterin B) and guaricura (bacterin C), were evaluated in male hamsters (Mesocricetus auratus) by comparing the agglutinating and neutralizing antibodies titers using microscopic agglutination (MAT) and in vitro growth inhibition (GIT) tests. The immunization schedule was based on two 1.0 mL doses of non-diluted formalininactivated whole culture bacterin given through subcutaneous route with 10-day interval. The challenge was performed ten days after the second vaccine dose, when the animals were inoculated with 0.2 mL of non-inactivated cultures of each serovar through intraperitoneal route. On the 21st post-challenge day (PCD), all animals were bled and their sera were joined in pools (n=8) and tested by MAT and GIT. All vaccinated and control animals presented no clinical signs of leptospirosis after the challenge, but the serovar guaricura was isolated from the kidneys of control animals on the 21st PCD. The MAT results showed cross agglutinins between serovars hardjo and wolffi, and between wolffi and guaricura. The GIT results revealed the presence of cross neutralizing antibodies between serovars wolffi or guaricura against hardjo, wolffi and guaricura. It was found that the tested strain of serovar hardjo did not produce detectable levels of neutralizing antibodies, indicating its poor immunogenicity

Neutralization test in mice (MNT) using effective dose 50 (ED 50) and International Units (IU) on bovine's sera vaccinated with an inactivated rabies virus vaccine

Os resultados do teste de soroneutralização em camundongos, aplicado em soro de bovinos que haviam sido vacinados previamente com uma vacina comercial de vírus inativado, foram calculados e expressos em logarítimo (base 10) da dose eficaz 50 (DE 50) ou em unidade internacional/ml (UI/ml). A análise estatística revelou uma correlação não-paramétrica de Spearman r = 0,6469, e quando do impedimento de expressar os resultados em UI/ml, a prova de soroneutralização em camundongos com resultados expressos em DE 50 é ainda um procedimento útil para determinar se os bovinos responderam à vacinação anti-rábica.

Influence of canine brain decomposition on laboratory diagnosis of rabies

Cérebros de cäes infectados com o vírus da raiva foram submetidos à decomposiçäo, deixando-os à temperatura ambiente de 25 a 29 grau C por até 168 horas. A cada 24 horas, fragmentos de cérebros foram analisados pela imunofluorescência (IF) e inoculaçäo intracerebral em camundongos (IC) para confirmar o diagnóstico de raiva e medir o efeito da putrefaçäo na acurácia do teste. Após 48 horas do início do experimento o teste de IC começou a ser prejudicado, detectando-se quatro resultados negativos, enquanto que, após 72horas, 100 por cento dos resultados foram negativos para IC e apenas um foi negativo para IF, indicando que o período limite para um diagnóstico seguro está entre 24 e 48 horas antes da recomendam o envio de material suspeito para laboratorial, no entanto, o uso de materiais em adiantado estado de decomposiçäo näo é o diagnóstico adequado, devido à ocorrência de resultados falsos-negativos

Effect of a booster-dose of rabies vaccine on the duration of virus neutralizing antibody titers in bovines

Humoral immune response using inactivated rabies vaccine was studied in 35 nelore cross-bred bovines of western region of Sao Paulo state. Ninety days after vaccination, 13 (92.8 percent) animals presented titers >/= 0.51U/ml, through mouse neutralization test. After 180 days, 9 (64.3 percent) sera showed titers >/= 0.51U/ml, after 270 days, only one (7. 1 percent) showed a titer of 0.51U/ml, and after 360 days, all animals showed titers < 0.5lU/ml. Group of animals receiving booster dose 30 days after vaccination presented, two months after, all with titers > 0.51U/ml. At 180 days, 17(80.9 percent) sera presented titers > 0.51U/ml; at 270 days, 15 (71.4 percent), with titers >/= 0.51U/ml and at 360 days, 4 (19.0 percent, with titers >/= 0.51U/ml. Booster-dose ensured high levels of neutralizing antibodies for at least three months, and 240 days after revaccination, 71.4 percent of animals were found with titers >/=0.51U/ml

Influência da matéria orgânica na atividade micobactericida de cinco desinfetantes de uso pecuário / Influence of the organic matter on the mycobactericidal activity of five chemical disinfectants used for livestock

Tendo em vista que a maioria dos desinfetantes químicos tem a sua atuaçäo antimicrobiana prejudicada pela presença de matéria orgânica, o objetivo do presente trabalho foi o de investigar, comparativamente, a influência da presença de fezes ou de soro de bovinos sobre a atividade micobactericida de desinfetantes químicos de uso pecuário. Foram ensaiados cinco desinfetantes: A- hipoclorito de sódio; B - combinaçäo de fenóis e cresóis; C - combinaçäo de aldeídos e amônio quaternário; D - iodóforo; E - composto fenólico. A suspensäo microbiana foi representada por uma cultura de Mycobacterium fortuitum na concentraçäo de 0,0005//(peso úmido). O período de atuaçäo dos desinfetantes foi de 60 minutos, à temperatura de 4 a 8 §C. A interrupçäo da açäo dos desinfetantes foi estabelecida pelo emprego de inativantes. A recuperaçäo dos microrganismos remanescentes foi obtida por cultivo em meio de Lowenstein-Jensen, com quantificaçäo do número de unidades formadoras de colônias (U.F.C.). Os produtos "A", "B" e "C" revelaram possuir atividade micobactericida em presença de matéria orgânica, com percentuais de reduçäo do número de U.F.C. em relaçäo aos controles, superiores a 55,0//. O produto "D" apresentou variabilidade de comportamento frente ao sistema de ensaio adotado. O produto "E" mostrou-se destituído de poder micobactericida. A despeito de apresentar percentuais de reduçäo de U.F.C. em relaçäo aos controles, superiores a 90//, o produto "A" teve a sua atividade micobactericida inibida pela matéria orgânica (Teste U de Mann-Whitney: nível de significância de 0,05). O produto "B" foi inibido apenas quando a matéria orgânica foi representada por soro bovino. O produto "C" näo apresentou reduçäo de seu poder micobactericida quando em presença de soro ou fezes

Emprego de soro anti-rábico terapêutico na produçäo de conjugado para a reaçäo de imunofluorescência na raiva / Use of therapeutic antirabic serum in the production of conjugate for the direct immunofluorescence of rabies

Uma metodologia de produçäo de conjugado imunofluorescente anti-rábico a partir de soro hiperimune eqüino para fins terapêuticos é descrita. A fraçäo IgG do soro é purificada de forma simples e rápida e posteriormente marcada com o fluorocromo. Através dessa metodologia, laboratórios que näo disponham de infraestrutura para produçäo de soro hiperimune anti-rábico podem obter conjugados de boa qualidade

Course of secondary humoral immune response shortly after revaccination with BHK-21 cell culture inactivated rabies vaccine adjuvanted with aluminum hydroxide

O fenômeno do consumo de antígeno, devido à presença de anticorpos neutralizantes específicos para a raiva, em bovinos previamente vacinados e a sua possível interferência na resposta imunológica humoral, decorrente de revacinaçäo, foi investigado em cinco bovinos mestiços azebuados, criados em condiçöes de campo. A revacinaçäo foi realizada 180 dias após a primeira aplicaçäo, utilizando uma vacina comercial inativada, preparada em células BHK-21. As amostras de soros foram obtidas em intervalos sequenciais de 0 (zero), 24, 72 horas, sete e 14 dias, em cada vacinaçäo e foram submetidas à prova de neutralizaçäo em camundongos para a pesquisa de anticorpos. O título médio de anticorpos neutralizantes, encontrado para o momento imediatamente antes da primeira vacinaçäo foi < 1:5,24 e 72 horas após a vacinaçäo foi < 1:6,25; no sétimo dia pós-vacinaçäo o valor médio foi de 1:144 ñ 51; aos 14 dias pós-vacinaçäo, 1:3.460 ñ 1.329. Todos os animais apresentaram títulos detectáveis no 180§ dia pós-vacinaçäo, com um valor médio de 1:58 ñ 14; no entanto, 24 horas após a dose revacinante, foi detectado um valor médio de 1:129 ñ 80, ascendendo para 1:277 ñ 161 no 3§ dia pós-revacinaçäo, e níveis crescentes no 7§ e no 14§ dia pós-revacinaçäo, com valores, respectivamente, superiores a 1:6.400 e 1:25.600, indicando o estabelecimento de uma resposta anamnéstica plena. Näo foi observado o efeito do consumo do antígeno e a conseqüente diminuiçäo nos títulos de anticorpos, imediatamente após a revacinaçäo

Efeito da concentraçäo do soro sobre a sensibilidade e a especificidade da reaçäo de soroaglutinaçäo microscópica aplicada ao diagnóstico da leptospirose suína, tendo como antígeno a L. biflexa estirpe Buenos Aires / The influence of serum concentration on the sensitivity and specificity of the microscopic aglutination test, using the L. biflexa, Buenos Aires strain, as antigen for diagnosing swine leptospirosis

Foi estudada a influência da variável concentraçäo de soro sobre os resultados da reaçäo de soroaglutinaçäo microscópica (SAM) aplicada ao exame de grupos de suínos controlados. Dos 29 animais utilizados, nove permaneceram como testemunhos (Grupo "A"), dez receberam, durante três dias, água de bebida contaminada por L. biflexa estirpe Buenos Aires (Grupo "B") e dez foram inoculados pela via intraperitoneal com uma estirpe virulenta de L. interrogans sorotipo pomona (Grupo "C"). As amostras de soro examinadas foram obtidas no 5§, 15§m 30§, 39§ e 51§ dia da investigaçäo, perfazendo um total de 145 amostras. Os soros foram examinados nas diluiç*es de 1:10; 1:40; 1:80 e 1:100. A análise dos resultados considerou como especificidade absoluta o percentual de resultados negativos no grupo "A" e como sensibilidade absoluta o percentual de resultados positivos obtidos no grupo "C". Os resultados obtidos demonstratam que a medida em que se aumentou a concentraçäo do soro houve concomitentemente um aumento na sensibilidade e uma diminuiçäo na especificidade dos resultados obtidos com o antígeno de L biflexa estirpe Buenos Aires. Para este antígeno o maior valor encontrado simultaneamente para as características de sensibilidade e de especificidade foi o de 60% na diluiçäo do soro de 1:20.